Evaluación genotóxica y del daño oxidativo inducido en Cnesterodon decemmaculatus (Pisces:Poecilidae) por herbicidas

El objetivo del presente trabajo de Tesis Doctoral fue evaluar los efectos letales y subletales inducidos por dos herbicidas auxínicos ampliamente utilizados tanto en Argentina como en el agro mundial, el dicamba (DIC) y el ácido 2,4-diclorofenoxiacético contenidos en las formulaciones nacionales Banvel® (57,7% DIC) y DMA® (58,4% 2,4-D), respectivamente. Es ampliamente conocido que en las últimas décadas, la cantidad de plaguicidas utilizados en los agroecosistemas aumentó significativamente. La aplicación masiva e intensiva, sumado a falta de regulación del uso de estos agroquímicos representa una preocupación para la salud humana y ambiental, ya que pueden producir múltiples consecuencias negativas a nivel de los organismos, poblaciones, comunidades y ecosistemas perturbando funciones vitales como el comportamiento, reproducción, evasión de predadores y recolección de alimento, entre otros, afectando su la supervivencia y la biodiversidad finalmente de las especies. Los efectos inducidos por los mismos fueron evaluados sobre el poecílido Neotropical Cnesterodon decemmaculatus mediante el empleo de una batería de biomarcadores de efecto tales como letalidad, comportamiento, genotoxicidad y de estrés oxidativo en ensayos agudos de laboratorio. Adicionalmente, se evaluó el efecto letal de las posibles interacciones (aditividad, sinergismo o antagonismo) resultantes de la aplicación conjunta de ambos herbicidas usando mezclas equitóxicas y no equitóxicas de los mismos. Asimismo, se evaluó el efecto genotóxico inducido por DIC y 2,4-D luego de una exposición a largo plazo de los peces a estos herbicidas. Como biomarcador de letalidad se utilizó la determinación de la concentración letal 50 (CL50), la cual en adición a ser un parámetro útil y ampliamente utilizado para establecer la toxicidad de un compuesto, fue empleada para determinar las concentraciones a utilizar en los ensayos subletales a realizar en la presente Tesis Doctoral. Las alteraciones en el comportamiento evaluadas fueron aglomeración en el fondo del acuario (AFA), movimiento lento (ML), reacción lenta (RL) y natación anormal (NA) y se procedió al cálculo de parámetros como NOEC y LOEC para las mismas. En adición, para la evaluación de los posibles efectos genotóxicos se utilizaron diferentes biomarcadores de efecto, como el ensayo de MNs, la inducción de otras anormalidades nucleares y la variante alcalina del ensayo cometa (EC) utilizando células sanguíneas de este poecílido. Posteriormente, se empleó la modificación del EC con enzimas de restricción con el objetivo de determinar el posible mecanismo de acción ejercido por DIC y 2,4-D por tratamiento con endunucleasas Endo III y Fpg, enzimas que detectan oxidación de bases pirimidínicas y púricas, respectivamente. Por otro lado, se analizó la posible respuesta antioxidante inducida por ambos herbicidas auxínicos empleando biomarcadores enzimáticos y no enzimáticos como la detección de variaciones en los niveles de catalasa (CAT), glutatión-S-transferasa (GST) y glutatión (GSH). Adicionalmente, se evaluó la variación en los niveles de acetilcolinesterasa (AChE) como biomarcador de neurotoxicidad. Con el objetivo de analizar las posibles interacciones resultado de la aplicación conjunta de ambos herbicidas y el efecto que podrían ejercer sobre C. decemmaculatus, se realizaron ensayos de toxicidad de mezclas a concentraciones equitóxicas y no equitóxicas de ambos herbicidas. Finalmente, con el objetivo de evaluar el efecto deletéreo a largo plazo ejercido por los herbicidas DIC y 2,4-D, se evaluó la inducción de lesiones primarias en el ADN en células sanguíneas de C. decemmaculatus mediante el EC en ejemplares expuestos de manera crónica a estos herbicidas. Los resultados de los estudios de letalidad revelaron que el formulado Banvel®, produjo efectos letales con un valor de CL5096h de 1639 mg/L mientras que el formulado DMA®, presentó un valor de CL5096h de 1008 mg/L. Luego de la exposición a ambos herbicidas, se observaron alteraciones en los patrones de comportamiento que difirieron significativamente con respecto a los valores controles para los cuatro tiempos de exposición, en el lapso de 0-96 h. Los resultados del ensayo de MNs revelaron un aumento significativo de la frecuencia de MNs a las 48 h de exposición para la concentración más alta ensayada del formulado de DIC (1229 mg/L), pero dicha diferencia no fue observada luego de las 96 h de exposición al mismo. En los peces expuestos a 2,4-D, un aumento significativo fue observado con todas las concentraciones ensayadas, en el rango de 252-756 mg/L, para ambos tiempos de exposición (48 y 96 h). En relación a los resultados del EC, se observó un aumento significativo con respecto a los valores control en el porcentaje de nucleoides dañados y en el índice de daño genético (IDG) tanto para el formulado de DIC como para la formulación de 2,4-D en el rango de concentraciones de 410-1229 y 252-756 mg/L, respectivamente, luego de 48 y de 96 h de exposición. El EC modificado con enzimas de restricción puso en evidencia que las células de los peces que recibieron un post-tratamiento con la enzima Fpg mostraron un aumento significativo del daño oxidativo neto, revelando que ambos herbicidas auxínicos indujeron daño en el ADN mediante la oxidación de purinas. Por otro lado, las muestras que recibieron el post tratamiento con Endo III no mostraron diferencias significativas respecto al grupo control. En cuanto a los resultados de los biomarcadores enzimáticos y no enzimáticos, luego de la exposición tanto a DIC como a 2,4-D, la actividad de CAT y GST aumentó significativamente con respecto a valores controles luego de 48 y 96 h de exposición. El análisis de la actividad de AChE mostró una disminución significativa sólo luego de las 96 h de exposición para ambos herbicidas auxínicos evaluados, pero dicha diferencia no fue observada luego de 48 h de tratamiento. En adición a los biomarcadores enzimáticos evaluados, la actividad de GSH mostró una disminución significativa de su actividad a las 48 para el formulado conteniendo DIC y a las 96 h para el formulado 2,4-D. Los resultados de los ensayos destinados a evaluar la toxicidad y las posibles interacciones resultantes de la mezcla entre los formulados de DIC y 2,4-D, demostraron para mezclas equitóxicas un patrón aditivo entre las mismas, mientras que para mezclas no equitóxicas se observó un patrón sinérgico en las cuatro combinaciones no equitóxicas ensayadas. Finalmente, la evaluación de los efectos genotóxicos inducidos por ambos herbicidas mediante la variante alcalina del EC luego de una exposición crónica empleando concentraciones equivalentes al 2,5% y 5% de la CL5096h, demostró que el DIC fue capaz de inducir lesiones primarias en la molécula de ADN evaluada mediante el EC alcalino luego de 7 y 14 d cuando fue expuesto a una concentración equivalente al 2,5% de la CL5096h, y luego de 7 d a una concentración equivalente al 5% de la CL5096h. Adicionalmente, mediante la misma metodología, el herbicida 2,4-D fue capaz de inducir lesiones primarias en la molécula de ADN luego de los 7, 14, 21 y 28 días de exposición a DIC y 2,4-D. Los resultados de los estudios realizados en el presente trabajo de Tesis Doctoral representan una evidencia concreta que los herbicidas DIC y 2,4-D en sus formulaciones comerciales Banvel® y DMA® deben ser considerados agentes inductores tanto de mortalidad como de efectos subletales tales como alteraciones en el comportamiento, efectos cito y genotóxicos y como agentes capaces de generar alteraciones en el balance oxidativo, tanto enzimáticos y no enzimáticos en C. decemmaculatus. Adicionalmente, estos herbicidas deberían ser clasificados según los valores de CL5096h obtenidos como compuestos nocivos (categoría III) para C. decemmaculatus de acuerdo a los patrones internacionales de clasificación de riesgo toxicológico para especies acuáticas. Es relevante destacar que las concentraciones empleadas en el presente trabajo de Tesis Doctoral se encuentran en el orden de mg/L, mientras que hasta el presente, las detectadas en el ambiente acuático se encuentran en el orden de μg/L. Aun así, ante las condiciones predominantes en el modelo de producción actual y al escaso control gubernamental existente en nuestro país, no podría descartarse la posibilidad de que ambos herbicidas auxínicos, DIC y 2,4-D, puedan ingresar y contaminar los diferentes compartimentos ambientales ejerciendo efectos deletéreos y comprometiendo la salud no sólo para la especie evaluada, C. decemmaculatus, sino también de otros organismos, incluyendo los seres humanos.The aim of the current Doctoral Thesis was to evaluate the lethal and sublethal effects induced by two auxinic herbicides employed worldwide, dicamba (DIC) and 2,4- dichlorophenoxyacetic acid (2,4-D) contained in the Banvel® (57.7% DIC) and DMA® (58.4% 2,4-D) formulations marketed in our country. In the last decades, the amount of pesticides used in agroecosystems has significantly increased. The widespread, intensive and non regulated application of these agrochemicals represent a serious concern for human and environmental health, as they can produce multiple consequences at organism, population, community and ecosystem levels, disturbing vital functions of organisms such as behavior, reproduction, predators evasion and food gathering, among others, and thus the survival and biodiversity. The effects induced by these herbicides were evaluated on the Neotropical poecilid Cnesterodon decemmaculatus by biomarkers of lethality, behavior, genotoxicity and oxidative damage under acute laboratory assays. Additionally, the possible interactions (additivity, synergism or antagonism) resulting from the joined application of both herbicides were evaluated by lethality assays using equitoxic and non-equitox mixtures. Furthermore, the genotoxic effect induced by DIC and 2,4-D after a longterm exposure through the alkaline single cell gel electrophoresis assay (SCGE, comet assay) was assayed. The determination of the LC50 was employed as a biomarker for lethality and for determining the concentrations of the sublethal assays in the present Doctoral Thesis. Behavioral changes as gathering at the bottom of the aquarium (GBA), slowness in motion (SM), slow reaction (SR) and abnormal swimming (AS) were evaluated and employed for calculating NOEC and LOEC parameters. In addition, for evaluating the possible genotoxic effects, different biomarkers of effect were employed such as the micronuclei (MNs) test, the induction of other nuclear abnormalities and the alkaline comet assay using blood cells of this poecilid. The modified SCGE methodology with the addition of restriction enzymes was employed in order to determine the possible mechanism of action exerted by DIC and 2,4-D, through the detection of oxidated pyrimidine and purine bases by enzymes Endo III and Fpg, respectively. Moreover, the possible antioxidant response induced by both auxinic herbicides was analyzed using enzymatic and non-enzymatic biomarkers such as the detection of variations in the levels of catalase (CAT), glutathione-S-transferase (GST), acetylcholinesterase (AChE) and glutathione (GSH). In addition, in order to analyze the possible interactions resulting from the joined application of both herbicides and the effect that they could exert on C. decemmaculatus, acute toxicity tests of mixtures were carried out employing equitoxic and non-equitoxic concentrations of both herbicides. Finally, to evaluate the chronic effects induced by the herbicides DIC and 2,4-D, the induction of primary lesions in the DNA in blood cells of C. decemmaculatus was assayed by the SCGE assay. Lethality results revealed that the DIC-based formulation Banvel® exerted lethal effects with a LC5096h value of 1639 mg/L while the 2,4-D-based formulation DMA® had a LC5096h a value of 1008 mg/L. Results of behavioral changes on individuals exposed to DIC and 2,4-D showed significant variations respect to the control values within the 0-96 h exposure range. The results reveal an increased frequency of MNs in those fish exposed to the highest concentration (1229 mg/L) of DIC during 48 h but not in fish exposed to the herbicide for 96 h, regardless of the concentration of herbicide assayed. In 2,4-D- exposed fish, the enhancement in MNs frequency was observed at all concentrations assayed within the range 252-756 mg/L for both exposure times (48 and 96 h). In addition, both herbicides were able to induce single-strand breaks and/or alkali sensitive sites into DNA, revealed by the SCGE assay regardless of the concentration and exposure time. Furthermore, the modified comet assay showed that cells post-treated with the restriction enzyme Fpg showed a significant increase of the oxidative damage, revealing that both auxinic herbicides induced DNA damage through the oxidation of purines. On the other hand, post treatment with restriction enzyme Endo III did not showed significant differences with their respective control group. Regarding the results of the enzymatic and non-enzymatic biomarkers, significant increased activities of the enzymes CAT and GST were observed in fish exposed to DIC- and 2,4-D-based formulations for 48 and 96 h, respectively. The analysis of AChE activity showed a significant decrease only after 96 h of exposure for both herbicides but such difference was not observed after 48 h of exposure. Additionally to the aforementioned altered enzymatic markers, a decrease of GSH was registered in specimens treated for 48 and 96 h with either DIC- and 2,4-D-herbicide formulations. The results of the tests aimed to evaluate the toxic effects exerted when C. decemmaculatus was exposed simultaneously to the DIC- and 2,4-D-based formulations Banvel® and DMA® , respectively, showed for equitoxic mixtures an additive pattern, while for nonequitoxic mixtures a synergistic pattern was observed in the four non-equitoxic combinations tested. Finally, the chronic sublethal effects showed an increased frequency of DNA breaks estimated by the alkaline SCGE in fish exposed to 2.5% of DIC LC5096h for 7 and 14 days whereas this enhancement was observed only after 7 days of exposure to a concentration equivalent to 5% of the LC5096h. In individuals chronically exposed to concentrations equivalent to 2.5 and 5% of 2,4-D LC5096h increased the frequencies of breaks in DNA estimated by the alkaline SCGE in fish exposed for 7, 14, 21 and 28 days. Overall, the results obtained in the present Doctoral Thesis represent a concrete evidence that the auxinic herbicides DIC and 2,4-D present in their commercial formulations Banvel® and DMA ® , respectively, should be considered as oxidizing agents able to induce both mortality and sub-lethal effects such as alterations in behavior, genotoxic effects and alterations of enzymatic and non-enzymatic biomarkers in C. decemmaculatus. Furthermore, these herbicides should be classified according to the values of LC5096h obtained as harmful compounds (category III), for C. decemmaculatus according to the international standards of toxicological risk classification for aquatic species. Given the prevailing conditions in the current agronomic-production model, it cannot be rule out the possibility that both auxinic herbicides can enter and contaminate different environmental compartments, exerting deleterious effects and compromising the health not only of our test species, C. decemmaculatus, but also of other organisms, among which human beings are included.Fil: Ruiz de Arcaute, Celeste. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Naturales y Museo. Laboratorio de Citogenética; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata; Argentin

Genotoxicity and Cytotoxicity Exerted by Pesticides in Different Biotic Matrices-An Overview of More Than a Decade of Experimental Evaluation

Agrochemicals represent one of the most important sources of environmental pollution. Although attempts to reduce agrochemical use through organic agricultural practices and the use of other technologies to control pests continue, the problem is still unsolved. Recent technological advances in molecular biology and analytical science have allowed the development of rapid, robust, and sensitive diagnostic tests (biomarkers) that can be used to monitor exposure to, and the effects of pollution. One of the major goals of our research laboratory is to evaluate comparatively the genotoxic and cytotoxic effects exerted by several pure agrochemicals and their technical formulations commonly used in Argentina on vertebrate cells in vitro and in vivo employing several end-points for geno and cytotoxicity. Among them are listed the herbicides dicamba and flurochloridone, the fungicide zineb, the insecticides pirimicarb and imidacloprid. Overall, the results clearly demonstrated that the damage induced by the commercial formulations is in general greater than that produced by the pure pesticides, suggesting the presence of deleterious components in the excipients with either a putative intrinsic toxic effect Larramendy et al. 4 or with the capacity of exacerbating 52 the toxicity of the pure agrochemicals, or both. Accordingly, the results highlight that: 1) A complete knowledge of the toxic effect/s of the active ingredient is not enough in biomonitoring studies; 2) Pesticide/s toxic effect/s should be evaluated assaying to the commercial formulation available in market; 3) The deleterious effect/s of the excipient/s present within the commercial formulation should not be either discarded nor underestimated, and 4) A single bioassay is not enough to characterize the toxicity of a agrochemical under study.Fil: Larramendy, Marcelo Luis. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Naturales y Museo. Cátedra de Citología; ArgentinaFil: Nikoloff, Noelia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Naturales y Museo. Cátedra de Citología; ArgentinaFil: Ruiz de Arcaute, Celeste. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Naturales y Museo. Cátedra de Citología; ArgentinaFil: Soloneski, Sonia Maria Elsa. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Naturales y Museo. Cátedra de Citología; Argentin

GENOTOXICIDAD INDUCIDA POR EL HERBICIDA FITOHORMONAL ÁCIDO 2,4-DICLOROFENOXIACÉTICO CONTENIDO EN LA FORMULACIÓN COMERCIAL DMA® EN Cnesterodon decemmaculatus (PISCES: POECILIIDAE)

El 2,4- diclorofenoxiacético (2,4-D) es un herbicida sistémico ampliamente usado en Argentina que imita la acción de las fitohormonas auxinas. Estas actúan alterando el desarrollo y crecimiento de las plantas. El presente trabajo tiene como objetivo evaluar los efectos letales y genotóxicos inducidos por el formulado DMA® (58,4% 2,4-D como sal de dimetilamina) en ejemplares adultos de C. decemmaculatus expuestos en condiciones de laboratorio. Se determinó la CL5096h, y a partir de ésta se expusieron individuos a concentraciones subletales de 252, 504 y 756 mg 2,4-D mg/l (correspondientes al 25, 50 y 75% de CL5096h) durante 48 y 96 h. Se utilizó ciclofosfamida (10 mg/l) y agua de red declorinada como control positivo y negativo, respectivamente. Como método de estudio se emplearon el ensayo de micronúcleos (MN) y de anormalidades nucleares (AN) en células circulantes sanguíneas. Los datos fueron analizados estadísticamente por ANOVA simple y test a posteriori de Dunnett. La CL5096h obtenida fue 1008,16 mg 2,4-D/l (LC95% 928,72-1070,31 mg 2,4-D/l). Los resultados demuestran que el 2,4-D incrementó la frecuencia de micronúcleos con todas las concentraciones ensayadas tanto a las 48 como a las 96 h de exposición (p<0,05). Asimismo, se observó un incremento significativo de AN (hendiduras nucleares y buds nucleares) en individuos expuestos a 756 mg 2,4-D/l por 48 h y a 504 mg 2,4-D/l por 96 h. Nuestros estudios evidencian la capacidad de 2,4-D de inducir daño en el ADN de células sanguíneas de esta especie autóctona. Asimismo, nuestros resultados constituyen la primera evidencia de evaluación genotóxica de 2,4-D sobre C. decemmaculatus

Home range size and overlap in <i>Liolaemus multimaculatus</i> (Squamata: Liolamidae) in pampean coastal dunes of Argentina

The home range is the space used by individuals to carry out their life cycles. The Sand dune lizard (Liolaemus multimaculatus) is a vulnerable species, endemic to the pampas coasts of Buenos Aires and Río Negro Provinces in Argentina. The aim of this work was to assess home range size and overlap of the Sand dune lizard. The study was carried out at Mar Chiquita Provincial Reserve. Home range and overlap were calculated using the minimum convex polygon method. The mean ± SD home range size for all individuals was 45.90 ± 74.37 m2 and no differences were observed between males and females (p = 0.49). However, an analysis without outlier individuals showed more accurate values for females (21.31 ± 17.59 m2) and males (33.52 ± 24.62 m2), and differences between sex were observed (p = 0.04). The relationship between body size and home range size was not significant (p = 0.41). Home range overlap was high (22 to 58%; Fig. 2) and did not show differences between males and females (p > 0.05 in all cases). Our results showed some similarities with the Brazilian sand lizard (Liolaemus lutzae) in which home range value is only up to 1.5 units higher than in L. multimaculatus. Further studies about this species' social system are necessary to understand the observed patterns.Facultad de Ciencias Naturales y Muse

Genotoxicity and Cytotoxicity Exerted by Pesticides in Different Biotic Matrices-An Overview of More Than a Decade of Experimental Evaluation

Agrochemicals represent one of the most important sources of environmental pollution. Although attempts to reduce agrochemical use through organic agricultural practices and the use of other technologies to control pests continue, the problem is still unsolved. Recent technological advances in molecular biology and analytical science have allowed the development of rapid, robust, and sensitive diagnostic tests (biomarkers) that can be used to monitor exposure to, and the effects of pollution. One of the major goals of our research laboratory is to evaluate comparatively the genotoxic and cytotoxic effects exerted by several pure agrochemicals and their technical formulations commonly used in Argentina on vertebrate cells in vitro and in vivo employing several end-points for geno and cytotoxicity. Among them are listed the herbicides dicamba and flurochloridone, the fungicide zineb, the insecticides pirimicarb and imidacloprid. Overall, the results clearly demonstrated that the damage induced by the commercial formulations is in general greater than that produced by the pure pesticides, suggesting the presence of deleterious components in the excipients with either a putative intrinsic toxic effect Larramendy et al. 4 or with the capacity of exacerbating 52 the toxicity of the pure agrochemicals, or both. Accordingly, the results highlight that: 1) A complete knowledge of the toxic effect/s of the active ingredient is not enough in biomonitoring studies; 2) Pesticide/s toxic effect/s should be evaluated assaying to the commercial formulation available in market; 3) The deleterious effect/s of the excipient/s present within the commercial formulation should not be either discarded nor underestimated, and 4) A single bioassay is not enough to characterize the toxicity of a agrochemical under study.Facultad de Ciencias Naturales y Muse

Genotoxicidad inducida por el herbicida fitohormonal ácido 2,4- diclorofenoxiacético contenido en la formulación comercial DMA® en <i>Cnesterodon decemmaculatus</i> (Pisces: Poeciliidae)

El 2,4- diclorofenoxiacético (2,4-D) es un herbicida sistémico ampliamente usado en Argentina que imita la acción de las fitohormonas auxinas. Estas actúan alterando el desarrollo y crecimiento de las plantas. El presente trabajo tiene como objetivo evaluar los efectos letales y genotóxicos inducidos por el formulado DMA® (58,4% 2,4-D como sal de dimetilamina) en ejemplares adultos de C. decemmaculatus expuestos en condiciones de laboratorio. Se determinó la CL5096h, y a partir de ésta se expusieron individuos a concentraciones subletales de 252, 504 y 756 mg 2,4-D mg/l (correspondientes al 25, 50 y 75% de CL5096h) durante 48 y 96 h. Se utilizó ciclofosfamida (10 mg/l) y agua de red declorinada como control positivo y negativo, respectivamente. Como método de estudio se emplearon el ensayo de micronúcleos (MN) y de anormalidades nucleares (AN) en células circulantes sanguíneas. Los datos fueron analizados estadísticamente por ANOVA simple y test a posteriori de Dunnett. La CL5096h obtenida fue 1008,16 mg 2,4-D/l (LC95% 928,72-1070,31 mg 2,4-D/l). Los resultados demuestran que el 2,4-D incrementó la frecuencia de micronúcleos con todas las concentraciones ensayadas tanto a las 48 como a las 96 h de exposición (pC. decemmaculatus.Universidad Nacional de La Plat

Genotoxicidad inducida por el herbicida fitohormonal ácido 2,4- diclorofenoxiacético contenido en la formulación comercial DMA® en <i>Cnesterodon decemmaculatus</i> (Pisces: Poeciliidae)

El 2,4- diclorofenoxiacético (2,4-D) es un herbicida sistémico ampliamente usado en Argentina que imita la acción de las fitohormonas auxinas. Estas actúan alterando el desarrollo y crecimiento de las plantas. El presente trabajo tiene como objetivo evaluar los efectos letales y genotóxicos inducidos por el formulado DMA® (58,4% 2,4-D como sal de dimetilamina) en ejemplares adultos de C. decemmaculatus expuestos en condiciones de laboratorio. Se determinó la CL5096h, y a partir de ésta se expusieron individuos a concentraciones subletales de 252, 504 y 756 mg 2,4-D mg/l (correspondientes al 25, 50 y 75% de CL5096h) durante 48 y 96 h. Se utilizó ciclofosfamida (10 mg/l) y agua de red declorinada como control positivo y negativo, respectivamente. Como método de estudio se emplearon el ensayo de micronúcleos (MN) y de anormalidades nucleares (AN) en células circulantes sanguíneas. Los datos fueron analizados estadísticamente por ANOVA simple y test a posteriori de Dunnett. La CL5096h obtenida fue 1008,16 mg 2,4-D/l (LC95% 928,72-1070,31 mg 2,4-D/l). Los resultados demuestran que el 2,4-D incrementó la frecuencia de micronúcleos con todas las concentraciones ensayadas tanto a las 48 como a las 96 h de exposición (pC. decemmaculatus.Universidad Nacional de La Plat

Introducción a la Citogenética

La citogenética es la rama de la genética que estudia la estructura, número, morfología y comportamiento del ADN que se condensa durante la división celular, con participación de proteínas para formar los cromosomas. Esta ciencia surgió a comienzos del siglo XX para explicar las leyes de Mendel mediante el comportamiento cromosómico por fusión de dos disciplinas, la citología y la genética, heredando de la primera los aspectos cualitativos, físicos y descriptivos, y de la segunda los enfoques cuantitativos y fisiológicos. Desde ese entonces, se ha avanzado en el desarrollo de técnicas y metodologías que brindan valiosos aportes en la resolución de problemas diagnósticos, taxonómicos y evolutivos, entre tantos otros, de diversos grupos animales y vegetales. Adicionalmente, estas tecnologías son ampliamente utilizadas en medicina y, mediante el análisis de tejidos, sangre o médula ósea, se identifican cambios en los cromosomas, como cromosomas rotos, faltantes o adicionales, cambios que pueden ser signo de una enfermedad genética, o de algunos tipos de cáncer. En el presente capítulo se abordará la estructura, función y comportamiento de los cromosomas junto con las anormalidades que pueden presentar.Facultad de Ciencias Naturales y Muse

Genotoxicidad y carcinogénesis

La Genotoxicología comprende el estudio de la acción nociva de xenobióticos sobre los componentes hereditarios de los seres vivos y las consecuencias que su exposición genera sobre los ecosistemas y la biota. Por lo tanto, los xenobióticos pueden ser agentes físicos tales como la temperatura, luz ultravioleta, radiaciones ionizantes, radiaciones electromagnéticas; agentes químicos, tales como metales, halógenos, ácidos orgánicos e inorgánicos, entre otros y agentes biológicos tales como algunos parásitos, bacterias, hongos y virus (Repetto Jiménez y Reppeto Kuhn, 2009). Esta disciplina estudia las modificaciones de la estructura genética y sus manifestaciones en la reproducción de la célula, tejido o del individuo, en procesos conocidos como mutagénesis, carcinogénesis y teratogénesis. Todo agente xenobiótico capaz de interactuar de manera negativa, tanto física como químicamente, con las bases del ADN y alterar su estructura es considerado un mutágeno. Por otro lado, el término “genotóxico” es más amplio, ya que incluye los agentes que inducen no sólo mutaciones sino cualquier otro tipo de daño acontecido en el ADN celular (Mudry y Carballo, 2006).Facultad de Ciencias Naturales y MuseoFacultad de Ciencias Exacta

Auxinic herbicides induce oxidative stress on Cnesterodon decemmaculatus (Pisces: Poeciliidae)

Pesticides might increase the production of reactive oxygen species (ROS). Dicamba (DIC) and 2,4-dichlorophenoxyacetic acid (2,4-D) are auxinic herbicides commonly applied in agroecosystems to control unwanted weeds. We analysed the oxidative damage exerted on the fish Cnesterodon decemmaculatus by an acute exposure to DIC- and 2,4-D-based herbicides formulations Banvel® and DMA®, respectively. The Endo III- and Fpg-modified alkaline comet assay was employed for detecting DNA damage caused by oxidative stress, whereas enzymatic and non-enzymatic biomarkers such as the activities of catalase (CAT), glutathione-S-transferase (GST), acetylcholinesterase (AChE), and glutathione content (GSH) were used to assess antioxidant response to these two herbicides. At the DNA level, results demonstrate that both auxinic herbicides induce oxidative damage at purines level. An increase on CAT and GST activities were detected in 48 h- and 96 h-treated specimens with both auxinics. GSH content decreased in fish exposed to DIC during 48 h and to 2,4-D after 96 h of exposure. Additionally, a diminished AChE activity in specimens treated with DIC and 2,4-D was observed only after 96 h. Total protein content decreased in fish exposed to both auxinics during 96 h. These results represent the first evaluation of oxidative damage related to DIC and 2,4-D exposure on a fish species as the Neotropical freshwater teleost C. decemmaculatus.Facultad de Ciencias Naturales y Muse